案例分析|经典质粒三步法纯化工艺

简介

质粒DNA可以作为疫苗或治疗性药物单独使用，或在病毒载体生产中作为病毒包装的原料，线性化的质粒DNA在mRNA疫苗或药物的生产中，作为模板用于mRNA的体外转录制备。

确定目标DNA序列并将其插入质粒后，在大肠杆菌中进行扩增以产生质粒DNA（pDNA）模板。裂解细胞后用氯化钙沉淀降低宿主细胞RNA（HC-RNA）污染，随后通过不同层析原理去除内毒素、宿主细胞蛋白质（HCP）、宿主细胞DNA （HC-DNA）、质粒DNA的降解片段或聚合体，最后用酶催化方法将超螺旋质粒线性化。

质粒工艺目标

获得一定规模的高纯度超螺旋质粒DNA（scDNA）

经典三步法

纯化流程图

三步法优势：

高效、稳健、平台化的工艺

具有操作简单、高纯度、易放大

三步纯化图谱

在分子筛纯化中，第一步使用NW Rose 6FF进行组群分离，主要去除大量RNA等小分子杂质，还可以进行缓冲液置换，衔接第二步亲和层析，一步收率达到92%。

在质粒亲和纯化中，纳微NW Rose Plasmid解决了客户原工艺中目标物在亲和淋洗过程中流穿的问题，从而将收率提高至79%。

在阴离子纯化中，最后一步采用了纳微NanoQ-30L，它的载量是原工艺中同类介质的一倍以上，从而把最终收率提高了将近10%。

结果

订货信息

苏州纳微科技股份有限公司（纳微科技 688690，SH）是一家专门从事高精度、高性能和高附加值微球材料研发和生产的国家高新技术企业，公司致力于建设全球领先的纳微米球精准制备和应用平台，是全球能提供多品种多规格微球产品的公司之一。

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