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蛋白质纯化的原则

蛋白质纯化的原则

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  • 发布时间:2022-03-15 10:45
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【概要描述】  蛋白质纯化在生化研究和应用中应用广泛,是一项重要的操作技术。一个典型真核细胞可以包含数千种不同的蛋白质,其中一些是丰富的,而一些只包含几个拷贝。为了研究某种蛋白质,我们必须首先从其他蛋白质和非蛋白质分子中纯化该蛋白质。

蛋白质纯化的原则

【概要描述】  蛋白质纯化在生化研究和应用中应用广泛,是一项重要的操作技术。一个典型真核细胞可以包含数千种不同的蛋白质,其中一些是丰富的,而一些只包含几个拷贝。为了研究某种蛋白质,我们必须首先从其他蛋白质和非蛋白质分子中纯化该蛋白质。

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  蛋白质纯化在生化研究和应用中应用广泛,是一项重要的操作技术。一个典型真核细胞可以包含数千种不同的蛋白质,其中一些是丰富的,而一些只包含几个拷贝。为了研究某种蛋白质,我们必须首先从其他蛋白质和非蛋白质分子中纯化该蛋白质。

  蛋白质纯化原则

  蛋白质纯化要利用不同蛋白间内在的相似性与差异,利用各种蛋白质之间的相似性去除非蛋白质物质的污染,利用蛋白质的差异性从其他蛋白质中纯化出目的蛋白质。每种蛋白质在大小、形状、电荷、疏水性、溶解性和生物活性方面都有差异。利用这些差异,可以从混合物如大肠杆菌裂解物中提取蛋白质以获得重组蛋白质。

  蛋白质纯化大致可以分为两个阶段:粗分离阶段和精净化阶段。蛋白质纯化的一般方法是树脂法。在粗分离阶段,目标蛋白质主要与其他细胞成分如DNA和RNA分离。由于此时样品体积大,成分杂,要求使用的树脂容量大,流速高,颗粒大,粒径分布宽,蛋白质能与污染物快速分离。必要时可加入相应的保护剂(如蛋白酶抑制剂),防止目的蛋白被降解。在精纯化阶段,需要更高的分辨率。在这一阶段,要将目标蛋白与分子量和理化性质相似的蛋白区分开来。应使用较小的树脂颗粒来提高分辨率。通常使用离子交换柱和疏水柱。在应用中,应综合考虑树脂的选择性和柱效。指的是选择性树脂结合目标蛋白的特异性,柱效指的是每种蛋白组分从树脂上逐一洗脱的能力。洗脱峰越窄,柱效越好。只有选择性好,洗脱峰太宽,蛋白质不能有效分离。


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