层析装柱的注意事项
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- 发布时间：2017-04-06 00:00
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装柱前要仔细看填料的使用说明书，每种填料都有自己的特性，以及特殊的装柱方法，针对不同的空柱，也要注意方法可能不同。
层析装柱的注意事项
装柱前要仔细看填料的使用说明书，每种填料都有自己的特性，以及特殊的装柱方法，针对不同的空柱，也要注意方法可能不同。
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作者：Snail
装柱前要仔细看填料的使用说明书，每种填料都有自己的特性，以及特殊的装柱方法，针对不同的空柱，也要注意方法可能不同。
1、装柱前要仔细看填料的使用说明书，每种填料都有自己的特性，以及特殊的装柱方法，针对不同的空柱，也要注意方法可能不同;
2、填料要加水搅拌成均匀悬液，悬液浓度依填料而不同，一般70-85%，迅速倒入空柱内，或吸或压，流速和具体步骤看说明书。
3、这一点非常重要：装柱包括以后使用中绝对不允许柱内进入气泡(bubble free)，柱头事先也要排除气泡。
4、选择合适的泵，首先是流速满足要求，脉冲尽量小。首选柱塞泵。
5、所有柱子尽量做到填料均匀，尤其是用于凝胶层析的柱子。装柱完成后，可用柱效测定的方法检查装填效果。一个装填合格的柱子的理论塔板高度应是填料平均粒径的2-4 倍，在此范围内越小越好。
6、准备上柱的液体应进行过滤，至少是0.45micrometre。
7、至于测序，我想大概不到1mg 应该足够了。
8、关于纯化，首先要考虑的是你的目标：纯度、数量、速度、收率等等，再根据样品的具体情况，尤其是目标蛋白的性质，确定纯化策略。通常三步曲：capture、purification、polishing。第一步先从大量或复杂样品中将目标蛋白“抓出”，与主要杂质分离;再用高选择性的层析去除绝大部分杂质;最后精细纯化，提供纯度至设定目标。到实际工作中，不要死靠三步，也许一步也许四步或更多，具体情况具体分析。所谓“三步”只是一种思路而已。
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