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亲和层析是怎么样的?常见的亲和析层配体有哪些

亲和层析是怎么样的?常见的亲和析层配体有哪些

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  • 发布时间:2023-02-08 10:01
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【概要描述】  亲和层析是液相色谱中具选择性和通用性的技术,依赖于蛋白质及其配体(如激素及其受体、酶及其底物、抗体和抗原)的可逆位点特异性结合。这种特异性相互作用可用于物质的一个相(称为亲和配体)固定在柱上作为亲和层析的固定相。

亲和层析是怎么样的?常见的亲和析层配体有哪些

【概要描述】  亲和层析是液相色谱中具选择性和通用性的技术,依赖于蛋白质及其配体(如激素及其受体、酶及其底物、抗体和抗原)的可逆位点特异性结合。这种特异性相互作用可用于物质的一个相(称为亲和配体)固定在柱上作为亲和层析的固定相。

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  亲和层析是液相色谱中具选择性和通用性的技术,依赖于蛋白质及其配体(如激素及其受体、酶及其底物、抗体和抗原)的可逆位点特异性结合。这种特异性相互作用可用于物质的一个相(称为亲和配体)固定在柱上作为亲和层析的固定相。通过亲和配体的选择性吸附,从复合组分中洗脱出目标蛋白。含有目标蛋白的复杂组分被加载到具有合适的缓冲体系和pH值的色谱柱上,使目标蛋白与亲和配体结合,而其他组分直接流过。然后可以从色谱柱上洗脱目标蛋白,洗脱方法取决于目标蛋白和配体之间相互作用的性质。洗脱后,色谱柱为下一个样品再生。

  亲和层析可以选择各种不同类型的结合物和固体支持物。通过优化不同的性质,例如特异性、选择性、可重复性、交联化学、成本效益等。亲和层析可用于大规模纯化抗体,并获得所需的产率和纯度。多年来,人们不断努力寻找和制造高质量的培养基和配体,并辅以优化和有效的亲和层析方法,以经济有效的方式生产越来越多的高纯度靶抗体。

  亲和析层是根据生物分子之间的特定相互作用来分离物质的色谱方法。前面提到的固定化金属亲和层析,就是用His标签标记目标蛋白,让金属离子捕获。而常规的方法是直接寻找对目标产物有亲和力的物质作为配体。下面给大家介绍常见的亲和析层配体。

  1、免疫球蛋白结合蛋白

  免疫球蛋白的恒定区(Fc)可以与蛋白A或蛋白G结合,是抗体纯化中有效和常用的方法之一。蛋白A来源于金黄色葡萄球菌,蛋白G来源于链球菌,两者都用于分离人和哺乳动物的IgG。此外,蛋白B(一种链球菌表面蛋白)可用于分离人IgA,而蛋白L(大链球菌)可与轻链相互作用,可用于纯化Fc片段缺失的蛋白。

  2、凝集素

  凝集素是一种高度特异性的蛋白质,与碳水化合物结合。因此,凝集素经常用于从复杂碳水化合物如多糖和糖蛋白中亲和纯化或浓缩碳水化合物基团。常见的凝集素是伴刀豆球蛋白A(Con A)。

  3、肝素

  肝素是一种天然存在的粘多糖,广泛应用于各种生物分子,尤其是各种酶的分离纯化,如DNA聚合酶、人凝血因子、脂蛋白脂肪酶等。

  4、苯甲醚

  丝氨酸蛋白酶是一个庞大的蛋白酶家族,占蛋白酶家族的三分之一。作用是断裂大分子蛋白质的肽键,使之成为小分子蛋白质或多肽,如胰蛋白酶、凝血酶、肠激酶等,属于丝氨酸蛋白酶类。茴香醚是一种广谱丝氨酸蛋白酶抑制剂。


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