亲和层析的相关介绍
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- 发布时间：2023-02-01 17:16
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亲和层析是通过将两种具有亲和力的分子中的一种固定在不溶性基质上，利用分子间亲和力的特异性和可逆性，分离纯化另一种分子。
亲和层析的相关介绍
亲和层析是通过将两种具有亲和力的分子中的一种固定在不溶性基质上，利用分子间亲和力的特异性和可逆性，分离纯化另一种分子。
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亲和层析是通过将两种具有亲和力的分子中的一种固定在不溶性基质上，利用分子间亲和力的特异性和可逆性，分离纯化另一种分子。
在亲和层析中，首先选择对待分离的生物大分子具有亲和力的物质作为配体，并将该配体共价结合到合适的不溶性基质上。将制备好的亲和吸附剂装柱平衡，当样品溶液通过亲和层析柱时，待分离的生物分子会与配体特异性结合，从而保留在固定相上;而其他杂质不能与配体结合，仍在流动相中，随洗脱液流出，所以色谱柱中只有生物分子需要分离。用合适的洗脱剂将其从配体上洗脱下来，以获得待分离的纯化物质。
亲和层析需要靶蛋白和配体的支持系统。早期的色谱方法以天然物质为支持物和结合配体，主要在酶的纯化过程中，如用不溶性淀粉纯化淀粉酶，用聚半乳糖醛酸酶纯化海藻酸，用麻仁球蛋白晶体纯化胃蛋白酶，用麻仁球蛋白纯化弹性蛋白酶。随着需要纯化的生物分子越来越多，天然配体和支持系统已经受到限制，因此需要从其他来源获得支持物质。这些支持材料需要满足以下特征：小的非特异性吸附、在所用缓冲系统中的不溶性、对适当流速的耐受性、足够的表面积以及活化后配体的容易连接。此外，这些支撑物质必须在柱中均匀分布，具有大的孔径和亲水性，在不同的化学物质和机械压力下保持稳定。为了获得理想的介电材料，测试了不同的支撑物和交联化学品。
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